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一种蝴蝶兰的组织培养方法

  本发明公开了一种蝴蝶兰的组织培养方法,所述步骤接种的密度,播种密度可以产生“群体效应”,从而使种子的发芽增快,所述无菌萌发培养基的组成包括胰蛋白胨、香蕉汁、活性炭和琼脂以及配比可以提供种子生长所需要的营养,促进种子的萌发,所述萌发的同时添加激素,可以使成苗数量增加,所述萌发的同时添加有机添加物,所述有机添加物为蔗糖,所述蔗糖的浓度为2?4%,可以对蝴蝶兰种子发芽、原球茎形成以及叶片生长具有促进作用。采用此种组织培养方法培养出来的蝴蝶兰具有发芽率高以及生长良的点,市场潜力大,前景广阔。

  蝴蝶兰,兰科蝴蝶兰属,是单茎性热带附生兰,分布于亚洲、大洋洲热带和亚热带 地区,多生长在阴湿多雾高温森林中的树干和湿石上,因其花形别致,花色艳丽,开花期长, 成为当今国际、国内花弁市场上受欢迎的花弁之一,素有"兰花皇后"之美称。通过无菌播 种与组织培养,获得大量良植株,可保持良特征,是进行大规模商品生产和新品 种选育的关键。目前蝴蝶兰的组织培养方法存在着发芽缓慢及成苗数量不高的问题。

  蝴蝶兰的组织培养技术蝴蝶兰为兰科多年生附--生草本,又名蝶兰,是兰科植物中栽培为广泛的种类之一,主要分布在热带及亚热带地区。其花形奇特,色彩艳丽,花期持久,素有兰中皇后的美誉,具有高的观赏和经济价值,在国内外花卉市场上受欢迎。蝴蝶兰是单茎气生兰,植株上少发育侧枝,比其他种类的兰花更难于进行常规无性养殖。组织培养是建立蝴蝶兰快速养殖无性系的重要手段。

  外植体的选择

  蝴蝶兰的茎尖、茎段、叶片、花梗侧芽、花梗节间、根尖等部位都已有培养成功的报道,方法各异,难度各有高低。蝴蝶兰不同外植体的成活率有差异,其中花梗侧芽的成活率高,达75%;其次为花梗,成活率为62.5%;叶片和根尖差,分别为12.5%和7.5%。针对不同外植体,取材方法也不同,通常取花梗节之间1~2cm长的幼嫩部分,切取长2~3mm的切段作为外植体。

  基本培养基的选择

  蝴蝶兰组织培养所采用的基本培养基包括MS、1/2MS、V、B5、KC、花宝及其改良型等,其中1/2MS对蝴蝶兰原球茎增殖效果好。

  外源激素的选择

  目前常使用的外源激素主要是生长素类(如IAA、2,4-D和NAA)和细胞分裂素类(如BA、ZT、KT)。蝴蝶兰组织培养中常用的细胞分裂素为6-BA,较高浓度(1~8mg/L)的6-BA能促进蝴蝶兰原球茎增殖,较低浓度(0.1~0.5mg/L)的6-BA则能促进原球茎分化。适宜浓度的6-BA配合较低浓度的NAA,更有利于原球茎的增殖,2.0mg/L6-BA和0.3mg/LNAA配合使用是蝴蝶兰原球茎增殖的佳组合。

  培养基添加物对蝴蝶兰增殖和分化的影响

  蝴蝶兰组织培养中常加入一些天然物质如椰乳、香蕉泥、番茄汁、苹果汁等,这些物质能提供一些必要的微量营养成分、生理活性物质和生长激素等,如加入100~200mg/L香蕉泥,具有较大的pH缓冲作用,有利于兰科植物的壮苗和生根。许多资料也表明,添加适量的香蕉泥、椰乳或含胶质的果菜汁等均对原球茎增殖有明显促进效果。

  适量的添加物对蝴蝶兰丛生芽的诱导和生根也有一定的促进作用。培养基中添加活性炭,低浓度(0.5~1.0g/L)时对原球茎增殖影响不明显,但可促进蝴蝶兰生根;高浓度(2.0~3.0g/L)时对原球茎增殖有促进作用,但原球茎有黄化现象。

  蔗糖作为培养基的能源物质和渗透调节剂,对原球茎的增殖生长影响较大。蔗糖含量为2%时,原球茎分化速度快;蔗糖含量为2%~3%时,促进芽的形成;蔗糖含量为5%时,有利于根的分化和生长。蔗糖含量为3%~5%时,抑制原球茎的分化和生长,分化质量和分化速度都显着下降。

  原球茎继代中褐化的防治

  蝴蝶兰和其它兰科植物一样,原球茎状体在继代培养过程中易褐变死亡,不易增殖。在培养基中添加1~2g/L活性炭,适时切除培养物的褐化部分并及时更换新鲜培养基,能有效抑制外植体褐变死亡;培养基中加入10%椰子水,也能促进原球茎的生长,减少原球茎增殖过程中的褐变。蝴蝶兰的群体效应很明显,单芽容易褐化死亡,且增殖较慢,因此,刚诱导出的原球茎状体不能过早切割转移,在继代阶段接种时,应尽量避免切成单芽,增殖时切块也不宜过小,否则容易褐化死亡。6~8月份高温季节采芽排出的褐变物质多,成活率也低,所以要避免在夏季采芽。
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