培养室是用来培养原种和栽培种的房间,培养室应坐北朝南,干燥、忌潮湿。建筑面积依使用目的而定,培养原种的培养室,室内面积12～15平方米,可培养1 200～1 500瓶菌种。培养栽培种的培养室,室内面积25～30平方米,可培养3 000～5 000瓶(袋)菌种。培养室高度好高于一般办公用房30～50厘米,有利于菇房散热,减少能源消耗。墙壁用夹墙,夹墙间距7～10厘米。

　　

　　一般架长130cm，架宽60cm，架高3040cm，根据培养材料所需的光照强度，培养架每层分别固定悬挂40W的日光灯24根，灯管与上一层架子之间应留有空间或装隔热层，每层培养架上安装平板玻璃，以使顶层的灯光能透射到下层的培养物上。如果要进行悬浮培养，培养室内还应有摇床。为了促使培养物的分化和生长，需要对培养环境的温度、光照和湿度进行人为调节。

　　

　　为实现这些条件，培养室通常要安装冷暖空调维持温度，常用的是25摄氏度±2摄氏度，而培养室的光周期和光照强度则由定时器和培养架上的灯管数量来调节，若外植体的培养不需光照（如愈伤组织的诱导和增殖），则需要考虑设置一个暗培养室。培养室的相对湿度应保持在70%80%，低于50%时培养基易变干，必要时可使用加湿器或换气设备进行调节。