组培室建设首要考虑的问题就是组培室需要哪些设备条件和需要什么样的培养条件。对这些有了全面了解以后,我们便可以因地制宜地新建或利用现有房屋建设实验室。在设计组培室时,一般情况应按组培的流程来设计,同时考虑人物分流顺畅,空间合理利用。植物组织培养要求严格的无菌的条件,需要一定专业仪器设备、器材和用具,同时还需要人工控制温度、光照、湿度等培养条件。
一个标准的组织培养实验室应当包括洗涤室、配置室、接种室、培养室、观察室(冷却室)、灭菌室、洗苗室等。在实际中可结合可行条件,合并一部分。
(一)洗涤室
洗涤室完成玻璃器皿和其它仪器的清洗、干燥和贮存。室内应配备大型水槽,用于培养器皿的洗涤,好是内衬白瓷砖的水泥槽。为防止碰坏玻璃器皿,可铺橡胶板,上下水道要畅通。备有大型塑料筐,用于放置培养器皿。可直接置于搁架上,以节约空间和便于运输工作。备有空干架,以空干涮净的培养器皿。
(二)配置室、灭菌室(可分开)
准备室要求明亮、通风。在准备室内要完成培养基制备以及试管苗出瓶、清洗与整理工作。如果房间较多,可将准备室分为洗涤室和配置室两部分。洗涤室专门负责试管苗出瓶与培养器皿的清洗工作;配置室则负责培养基的配制、分装、包扎和高压灭菌等工作。
为完成培养基的制备工作,准备室还应配备以下仪器设备:
1.工作台
其高度应方便配制工作。
2.药品柜
用以放置常用药品。
3.普通冰箱
主要用于贮存母液、各种易变质、易分解的化学药品以及植物材料等。
4.电子分析天平和托盘天平
电子分析天平精确度为0.001g,用于称取大量元素、微量元素、维生素、激素等微量药品;托盘天平精确度为0.1g,用于称取用量较大的糖和琼脂等。天平应放置在干燥、不受振动的固定操作台上。
5.纯水仪或电蒸馏水器
纯水仪提供纯水,水质好。电蒸馏水器, 采用硬质玻璃或金属制成。蒸馏水用于配制母液或培养基,配培养基可用自来水来代替,若实验要求严格的话,则须用蒸馏水。
6.磁力搅拌器
磁力搅拌器用于加速搅拌难溶的物质,如各种化学物质、琼脂粉等 。磁力搅拌器还可加热,使之更利于溶解。
7.恒温水浴锅或恒温振荡水浴
水浴锅用于难溶药品的溶解、琼脂的溶化等。若没有水浴锅,也可用1500或2000W电炉或电饭锅代替。电炉应配有铝锅。
8.酸度计
组织培养中培养基pH值的准确度是十分重要的,应当使用酸度计,若无酸度计,也可使用pH试纸进行粗测。首次使用酸度计前,应用标准液调节定位,然后固定。测量pH时,待测液必须充分搅拌均匀。如果培养基温度过高,测量时要调整pH计上的温度扭使之和培养基温度相当。注意保护好玻璃电极,用后电极应用蒸馏水冲洗净,盖上电极帽。
9.培养基分装设备
小型组织培养实验室可采用烧杯、漏斗等作为分装培养基的工具。也可采用医用“下口杯”作为分装工具,在“下口杯”的下口管上套一段软胶管,加一弹簧止水夹,使用时非常合用。更大规模或要求更率时,可考虑采用液体自动定量灌注设备。
10.高压灭菌锅
用以进行培养基和器械用具的灭菌。小规模实验室可选用小型手提式高压灭菌锅。如果是连续的大规模生产,应选用大型立式的或卧式的高压灭菌锅。通常以电作能源。
11.烘箱
用于干燥洗净的玻璃器皿,也可用于干热灭菌和测定干物重。用于干燥需保持80~100℃;进行干热灭菌需保持150℃,达1~3小时;若测定干物重,则温度应控制在80℃烘干。
12.恒温培养箱
内有温度调节器,生化培养箱还配有光源,用于植物材料的培养。
(三)接种室
接种室是进行植物材料的分离接种及培养物转移的一个重要操作室。其无菌条件的好坏对组织培养成功与否起重要作用。
在工作方便的前提下,无菌操作室宜小不宜大,一般7~8m2;要求地面、天花板及四壁尽可能密闭光洁,易于清洁和消毒。无菌操作室应配置拉动门,以减少开关门时的空气扰动。
无菌操作室要求干爽安静,清洁明亮,在适当位置吊装1~2盏紫外线灭菌灯,用以经常地照射灭菌。好能安置一小型空调,使室温可控,这样可让门窗紧闭,减少与外界空气对流。
无菌操作室应设有缓冲间,面积2 m2为宜。进入无菌操作室前在此更衣换鞋,以减少进出时带入杂菌。缓冲间好也安一盏紫外灭菌灯,用以照射灭菌。
无菌操作室的主要设备及用具有:
1.接种箱
在投资少的情况下,可以用接种箱来代替超净台。接种箱依靠密闭、药剂熏蒸和紫外灯照射来保证内部空间无菌。但操作活动受限制,准备时间长,工作效率低。
2.超净工作台
超净台的点是操作方便自如,比较舒适,工作效率高,准备时间短。开机10分钟即可操作,可进行长时间使用。并可以保证无菌材料在转移接种过程中不受污染。。
3.无菌操作用的器具。
按单人超净台上的用量计:酒精灯1个;20~25cm长的医用镊子1把;4号解剖刀1把,解剖刀片若干;15cm医用剪1把;500ml广口瓶1只,内放酒精,现代专业组培室多用接种器械灭菌器和容器口灭菌器,用于浸泡镊子、刀、剪等;用于架放灼烧过的刀、镊子的小架。
4.搁架。
贮放高压灭菌后等待接种的培养基。
(四)培养室
是将接种的材料进行培养生长的场所。培养室的大小可根据需要的培养架的大小、数目、及其它附属设备而定。其设计以充分利用空间和节省能源为原则。高度比培养架略高为宜,周围墙壁要求有绝热防火的性能。
培养材料放在培养架上培养。培养架大多由金属制成,一般设5层,低一层离地高约10厘米,其它每层间隔30厘米左右,培养架即高1.8米左右。培养架长度,因一般在每层上端装置日光灯,以供照明,所以都是根据日光灯的长度而设计,如采用28W日光灯,则长1.25m,21 W的长1米即可。宽度一般为50cm。
培养室重要的因子是温度,一般保持在20~27℃左右,可安装窗式或立式空调机。要求温度因热带植物和寒带植物等的种类不同而异,好不同种类有不同的培养室。