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植物组培培养和组培技术

  植物组织培养是一项技术性强、无菌条件要求高的工作,在进行植物组织培孬时,要有必要的实验设备条件和熟练的操作技术。

组培室仪器设备
  
  化学实植物组织培养和试管苗生产所使用的各种器具的洗談、干燥和保存,药品的称量、溶解、配制,培养基的分装、包扎和灭菌,植物材料的预处理,培养材料的观察分析等操作都在化学实验室中进行。化学实验室应有工作台和存放化学助剂的药品柜,以及放置常用玻璃器皿、试剂瓶等的器械橱或玻璃柜。并放有烘箱、冰箱、天平、蒸馏水器、高压灭菌锅以及酸度计等。
  
  培养容器的洗涤和培养基的灭菌,若无灭菌室和洗涤室也可在化学实验室中进行,但应在房间的一角,远离天平和冰箱,而且在墻壁上设置换气窗,以利通风排气,气窗的周围要用耐湿材料建造。如当地水质不良,还应添置一台玻璃蒸馏水器或金属蒸馏水器,以制取蒸馏水。
  
  接种室植物材料的接种、培养物的转移、试管苗的继代等,均需在无菌环境中进行,无菌条件的好坏、持续时间的长短,对减轻培养物的污染、提高工作效率关系很大。
  
  无操作室供外植体的接种、培养物的转移和原生质体的游离培养操作之用。要求用紫外光灯火菌。火菌后能长时间保持无菌状态,以利无菌操作。无菌室地而要平坦,墙壁要光滑,采用耐水、耐药的材料装修,避免消毒腐蚀。除出人口和通风囗外,均应密封并安装滑门,以减少与外界空气的对流·防止外界带菌尘埃的侵人。室内应尽量少放设备和器械,室内上方和门口应安装紫外线灯,用于空气及表面消毒。另外,要定期用甲醛和高锰酸钾熏蒸用70%的酒精或0巧%笨酚喷雾降尘和消毒。使用前先用2%新洁尔灭擦洗,然后开紫外线灯照射20分钟以上。无菌室外应有准备室,供操作人员更换工作服、工作帽和拖鞋之用,以防止带人病菌,以保证无菌室能长时间和大量进行无菌操作。
  
组培室仪器设备
 
  接种箱接种箱大小为长80一120厘米,宽40一厘米,高50、厘米,接种箱上面、前面及两侧均装有玻璃,前面出人口外装有布质袖罩。接种箱内装有紫外线灯,以利经常消毒,也可用有机玻璃制作接种箱。如无无菌室,可用接种箱代替,但必须安放在干净、光线好的室内。
  
  超净工作台超净工作台是目前植物组织培养上最常用的、最普及的无菌操作装置,与接种箱和无菌室相比,超净工作台既方便又舒适,无菌效果又好。它有单人、双人及3人式的,也有开放和密封式的。超净工作台一般较宽,购置和设计房屋时注意'以防门太窄而搬不进去。超净工作台主要是通过风机,这人的空气经过细菌过滤装置,再流过工作台。因此,超净工作台应放置在空气干净、地面无灰尘的地方,以延长使用期。使用过久,引起堵塞,需要清洗和更换过滤器。
  
  培养室培养室是人工条件下培养接种物及试管苗的场所。可分为普通培养室。照明设备和控温设备。一般要求温度在25±2℃之间,用控温仪
  
  下保证室内的温度恒定在规定的范围之内。为了便于检查温度、湿度的变化情况,要放置自动记录温度、湿度计。培养室的光源,一般采用白色荧光灯,光源通常置于培养物的上方或侧面。有些培养室还设有暗室,以进行晴培养获得黄化苗等。在培养室里,还要放置培养装置,最常见的是固体培养所需要的培养架。若要进行液体悬浮培养,还需要有摇床、转床等。节能培养室其特点是将配制培养基、接种、培养等步骤连贯在一起。其中实验室主要用来配制培养基,天平室除称量药品外,也可放置显微镜进行细胞学观察;灭菌室用以进行高压灭菌。培养室窗户要大,使光照充足,最好用双层玻璃,以利隔热和防尘。如果在楼房中设计组织培养室,则实验室、天平室、灭菌室可以放在中间楼道的两边,接种室和培养室在楼房的一端,不要中间走廊。
  
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  夏天温度可稳定周期25一3℃,在朝北面的培养室内“,也适合试管苗的生“要。冬天可在中间的“室“。二是节约开支。节能培养室可充分利用自然光能,开支就大大节省了。在冬季,南北的培养室可以作为试管苗的冷藏室,在春、夏、秋三季,中间的培养室可以作为暗培养室进行愈伤组织等的培养,或者作为培养无病毒植株的热处理培养室,进一步提高节能培养室的效益。三是试管苗的素质好。利用自然光培养出的试管苗,叶色绿,生长茁壮,比人工照光培养的要好。
  
  洗涤室植物组织培养对培养用具不仅要求质地好,而且对其清洁工作要求较严格,以防止一些有毒的或其他有害化学物质(如重金属离子、酸碱等)对培养物的不利影响。因此,个有一定规模的组织培养室,必须有专用的洗涤室,专门供辅助人员工作和贮藏洗净的培养瓶。洗涤室应设置大的二联洗涤池、工作台架、玻璃瓶晾干架、放培养瓶的架子和箱子、大型烘箱,还应有水箱、各种刷子等。洗涤室装有水槽用于用具的清洗,地面要耐湿并能排水。灭菌锅、蒸馏水器、干燥箱等可从化学实验室移人洗涤室,以方便操作。为节省房屋,器皿的清洗工作也可在走道上进行。
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  细胞学观察室在植物细胞和组织培养过程中,随时观察和记录其细胞学和形态解剖学的变化,故要进行显微观察、显微和摄影、组织切片、细胞染色等工作。因此,细胞学实验室应由3个小间组成,即进行一般操作间(切片、染色和材料准备等)、显微镜观察间和暗室。6,贮藏室有一间贮藏室更好。把暫时不用的器皿、用具等存放在贮藏室内,也可以用作种质保存。
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